Az áramlási citometria (FCM) egy sejtanalizátor, amely a festett sejtmarkerek fluoreszcencia-intenzitását méri. Ez egy csúcstechnológiás technológia, amelyet egyedi sejtek elemzésén és osztályozásán alapulva fejlesztettek ki. Gyorsan képes mérni és osztályozni a sejtek méretét, belső szerkezetét, DNS-ét, RNS-ét, fehérjéit, antigénjeit és egyéb fizikai vagy kémiai tulajdonságait, és ezen osztályozások gyűjteményén alapulhat.
Az áramlási citométer főként a következő öt részből áll:
1 Áramlási kamra és fluidikai rendszer
2 Lézerfényforrás és sugárformáló rendszer
3 Optikai rendszer
4 Elektronikus, tároló, kijelző és elemző rendszer
5 Sejtválogató rendszer
Ezek közül a lézerfényforrásban és a nyalábformáló rendszerben a lézergerjesztés a fluoreszcenciajelek fő mérése az áramlási citometriában. A gerjesztő fény intenzitása és az expozíciós idő összefügg a fluoreszcenciajel intenzitásával. A lézer egy koherens fényforrás, amely egyetlen hullámhosszú, nagy intenzitású és nagy stabilitású megvilágítást képes biztosítani. Ez az ideális gerjesztő fényforrás ezen követelmények teljesítésére.
A lézerforrás és az áramlási kamra között két hengeres lencse található. Ezek a lencsék a lézerforrásból kibocsátott kör keresztmetszetű lézersugarat egy kisebb keresztmetszetű (22 μm × 66 μm) elliptikus nyalábba fókuszálják. A lézerenergia ebben az elliptikus nyalábban normális eloszlás szerint oszlik el, biztosítva a lézerérzékelési területen áthaladó sejtek egyenletes megvilágítási intenzitását. Másrészt az optikai rendszer több lencse-, tűlyuk- és szűrőkészletből áll, amelyek nagyjából két csoportra oszthatók: az áramlási kamra előtt és után.
Az áramlási kamra előtti optikai rendszer egy lencséből és egy tűlyukból áll. A lencse és a tűlyuk (általában két lencse és egy tűlyuk) fő funkciója a lézerforrás által kibocsátott kör keresztmetszetű lézersugár fókuszálása egy kisebb keresztmetszetű ellipszis alakú nyalábba. Ez a lézerenergiát normális eloszlás szerint osztja el, biztosítva a sejtek egyenletes megvilágítási intenzitását a lézerérzékelési területen, és minimalizálva a kóválygó fény interferenciáját.
A szűrőknek három fő típusa van:
1: Hosszú áteresztő szűrő (LPF) – csak egy adott értéknél nagyobb hullámhosszúságú fényt enged át.
2: Rövidáteresztő szűrő (SPF) – csak egy adott értéknél kisebb hullámhosszúságú fényt enged át.
3: Sáváteresztő szűrő (BPF) – csak egy adott hullámhossztartományú fényt enged át.
A szűrők különböző kombinációi különböző hullámhosszú fluoreszcencia jeleket irányíthatnak az egyes fotoelektronsokszorozó csövekhez (PMT-k). Például a PMT előtti zöld fluoreszcencia (FITC) detektálására szolgáló szűrők az LPF550 és a BPF525. A PMT előtti narancssárga-vörös fluoreszcencia (PE) detektálására használt szűrők az LPF600 és a BPF575. A PMT előtti vörös fluoreszcencia (CY5) detektálására szolgáló szűrők az LPF650 és a BPF675.
Az áramlási citometriát főként sejtválogatásra használják. A számítógépes technológia fejlődésével, az immunológia fejlődésével és a monoklonális antitest technológia feltalálásával alkalmazásai a biológiában, az orvostudományban, a gyógyszerészetben és más területeken egyre szélesebb körben terjednek. Ezek az alkalmazások magukban foglalják a sejtdinamikai elemzést, a sejtapoptózist, a sejttípus meghatározását, a tumordiagnosztikát, a gyógyszerhatékonysági elemzést stb.
Közzététel ideje: 2023. szeptember 21.
