(Flow cytometry, FCM) egy sejtanalizátor, amely méri a festett sejtmarkerek fluoreszcencia intenzitását. Ez egy csúcstechnológiás technológia, amelyet az egyes cellák elemzésén és válogatásán alapulnak. Gyorsan képes mérni és osztályozni a sejtek méretét, belső szerkezetét, DNS-ét, RNS-ét, fehérjéit, antigénjeit és egyéb fizikai vagy kémiai tulajdonságait, és ezeknek az osztályozásoknak az összegyűjtésén alapulhat.
Az áramlási citométer főként a következő öt részből áll:
1 Áramlási kamra és folyadékrendszer
2 Lézeres fényforrás és sugárformáló rendszer
3 Optikai rendszer
4 Elektronikai, tároló-, kijelző- és elemzőrendszer
5 Sejtválogató rendszer
Ezek közül a lézeres gerjesztés a lézeres fényforrásban és sugárképző rendszerben a fluoreszcencia jelek fő mérése az áramlási citometriában. A gerjesztő fény intenzitása és az expozíciós idő összefügg a fluoreszcens jel intenzitásával. A lézer egy koherens fényforrás, amely egyhullámhosszú, nagy intenzitású és nagy stabilitású megvilágítást tud biztosítani. Ideális gerjesztő fényforrás ezeknek a követelményeknek a kielégítésére.
A lézerforrás és az áramlási kamra között két hengeres lencse található. Ezek a lencsék a lézerforrásból kibocsátott kör keresztmetszetű lézersugarat egy kisebb keresztmetszetű (22 μm × 66 μm) elliptikus sugárba fókuszálnak. A lézerenergia ezen az elliptikus sugáron belül a normál eloszlás szerint oszlik el, így egyenletes megvilágítási intenzitást biztosít a lézerérzékelési területen áthaladó sejtek számára. Másrészt az optikai rendszer több lencsékből, tűlyukakból és szűrőkből áll, amelyek nagyjából két csoportra oszthatók: az áramlási kamra előtt és után.
Az áramlási kamra előtti optikai rendszer egy lencséből és tűlyukból áll. A lencse és a tűlyuk (általában két lencse és egy tűlyuk) fő funkciója, hogy a lézerforrás által kibocsátott kör keresztmetszetű lézersugarat egy kisebb keresztmetszetű elliptikus sugárra fókuszálja. Ez a lézerenergiát normál eloszlás szerint osztja el, egyenletes megvilágítást biztosítva a sejtek számára a lézerérzékelési területen, és minimálisra csökkenti a szórt fény okozta interferenciát.
A szűrőknek három fő típusa van:
1: Hosszú áteresztő szűrő (LPF) – csak egy adott értéknél nagyobb hullámhosszú fényt enged át.
2: Rövid áteresztő szűrő (SPF) - csak egy meghatározott érték alatti hullámhosszú fényt enged át.
3: Sáváteresztő szűrő (BPF) - csak meghatározott hullámhossz-tartományban engedi át a fényt.
A szűrők különböző kombinációi különböző hullámhosszú fluoreszcens jeleket irányíthatnak az egyes fotomultiplier csövekhez (PMT). Például a PMT előtti zöld fluoreszcencia (FITC) érzékelésére szolgáló szűrők az LPF550 és a BPF525. A PMT előtti narancsvörös fluoreszcencia (PE) detektálására használt szűrők az LPF600 és a BPF575. A vörös fluoreszcencia (CY5) észlelésére szolgáló szűrők a PMT előtt az LPF650 és a BPF675.
Az áramlási citometriát elsősorban sejtválogatásra használják. A számítástechnika fejlődésével, az immunológia fejlődésével és a monoklonális antitest-technológia feltalálásával egyre szélesebb körben terjednek el alkalmazásai a biológiában, az orvostudományban, a gyógyszerészetben és más területeken. Ezek az alkalmazások magukban foglalják a sejtdinamikai elemzést, a sejt apoptózist, a sejttipizálást, a tumordiagnosztikát, a gyógyszerhatékonysági elemzést stb.
Feladás időpontja: 2023.09.21
